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干細胞分化命運的新理論
更新時間:2015-05-11   點擊次數(shù):895次

   zui近,前列腺素E2作為臍帶血移植藥物,在不同器官中,前列腺素可能是細胞生長的主要調控因子,知道它可以用于臍帶血移植,也能夠在肝臟中起作用,那么很可能前列腺素還能影響更多的其他器官。

    發(fā)現(xiàn)在干細胞分化形成內臟的區(qū)域中,前列腺素E2的含量存在一個梯度。當時已知藥物對斑馬魚胚胎進行化學篩選,以尋找能夠令造血干細胞增多的化合物。發(fā)現(xiàn)前列腺素E2的效果,它是*被發(fā)現(xiàn)有此效果的分子。肝臟和胰腺來源于共同的內胚層前體細胞。

1 細菌的生長狀態(tài):實驗中應密切注視細菌的生長狀態(tài)和密度,盡量使用對數(shù)生長期的細胞(一般通過檢測OD600來控制。DH5?菌株OD600為0.5時細胞密度是5×107/ml);

2 所有操作均應在無菌條件和冰上進行;

3 經CaCl2處理的細胞,在低溫條件下,一定的時間內轉化率隨時間的推移而增加,24小時達到zui高,之后轉化率再下降(這是由于總的活菌數(shù)隨時間延長而減少造成的);

4 化合物及無機離子的影響:在Ca2 的基礎上聯(lián)合其他二價金屬離子(如Mn2 或Co2 )、DMSO或還原劑等物質處理細菌,可使轉化效率大大提高(100-1000倍);

5 所使用的器皿必須干凈。跡量的去污劑或其它化學物質的存在可能大大降低細菌的轉化效率;

6 質粒的大小及構型的影響:用于轉化的應主要是超螺旋的DNA;顯示在這些負責肝臟/胰腺形成的干細胞上,存在著特殊的細胞膜受體,這些受體可以檢測周圍的前列腺素E2含量,希望能夠將其用于誘導多能干細胞iPSC,控制它們向肝細胞或者胰腺細胞分化。iPSC是將對成熟細胞進行重編程形成的,具有與干細胞類似的特性,這樣的方案將能幫助治療那些需要移植肝細胞或者相關器官受損的患者。

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